生命經緯專題

   免疫測定(immunoassay,IA)是應用免疫學技術測定標本的方法,其基本原理是抗原抗體的特異性識別。酶聯免疫吸附試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是實驗室比較常用的免疫檢測方法。本專題為您詳細講解免疫檢測中的基礎知識實驗操作步驟影響因素及 質量控制

免疫學檢測基礎知識

抗原、抗體:抗原是能在機體中引起特異性免疫應答的物質。抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關的Ig主要為IgG和IgM。。>>詳細

抗原抗體反應:抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態平衡,具有特異性、可逆性、敏感性3個重要性質。>>詳細

在臨床檢驗中的應用:由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應的抗原,因此免疫測定的應用范圍極廣 。>>詳細

免疫學檢測技術

常用的免疫學檢驗技術:      >>詳細

皮內試驗 (intrader rpmal test,ID)
免疫擴散(immunodiffusion)和免疫電泳(immunoelectrophoresis)
間接紅細胞凝集試驗(indirect haemagglutination test,IHA)
間接熒光抗體試驗 (indirect fluorescent antibody method,IFA)
對流免疫電流試驗 (counter-immunoelectrophoresis,CIE)
酶聯免疫吸附試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)
免疫酶染色試驗 (immunoenzyme staining test,IEST)
免疫印跡試驗(immunobloting technique,ELIB)

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ELISA的原理與類型

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:雙抗體夾心法測抗原、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗體、競爭法測抗原、捕獲包被法測抗體(經典方法)和ABS-ELISA法。>>詳細

抗原抗體反應

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ELISA的試劑

在臨床檢驗中一般采用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:    >>詳細
    (1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
    (2)酶標記的抗原或抗體(結合物);
    (3)酶的底物;
    (4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
    (5)酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;
    (6)洗滌液;
    (7)酶反應終止液。

 

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ELISA實驗Protocol

ELISA實驗常用Protocol
    在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。 >>詳細

ELISA試驗條件的選擇
    包括固相載體的選擇、載體的吸附條件、酶標抗體使用濃度的確定、抗原、抗體、清洗液和反應時間等7個要素  >>詳細

ELISA的操作要點
    本文敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點,珠式、管式及磁性球ELISA,國外試劑均與特殊儀器配合應用  >>詳細

ELISA試驗舉例
    >>ELISA(雙抗體夾心法)—檢測HBsAg
    >>ELISA法測定單克隆抗體的效價
    >>用ELISA法檢測幽門螺桿菌抗體
    >>ELISA測定傷寒桿菌“O”抗體
    >>豬瘟單克隆抗體ELISA 
    >>牛副結核ELISA

 


    ELISA 是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法,由于其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析等優點,已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域。ELISA 的影響因素較多,加強質量管理才能充分發揮其方法學的優點。
質量控制(Quality Control,QC)概述

全面質量管理的宗旨在于預防差錯的產生。質控圖的統計學質控的目的是檢出差錯。統計學的實驗室室內質控是全面質量管理中的一個重要環節。 >>詳細

分析前質控

人員培訓實驗是人操作的,因此檢驗人員需經過培訓。本文介紹分析前質量控制應該熟練掌握的幾方面的技術知識。 >>詳細

分析中質控

每個步驟包括加樣,溫育,洗滌,顯色,酶標儀讀數均應認真負責才能充分發揮ELISA 的高靈敏,強特異的優點。因此,應建立實驗項目的SOP。  >>詳細

ELISA的質量控制

本文在免疫檢測質量控制的相關知識基礎上,詳細分析ELISA試驗中可能遇到的質控問題。  >>詳細

ELISA試劑的臨床質量評價

ELISA試劑的評價(evaluation)分兩個方面:一是試劑本身的質量評價,符合一定要求后才能生產供應;一是在臨床應用中效果的評價。 >>詳細

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

guide

測定技術的發展主要在于方法學的發展,而方法學的發展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前,分子生物學正在并最終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而徹底的認識,其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。


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